原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。
原位杂交技术
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荧光原位杂交结果示意图
原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门技术,主要是利用核酸分子单链之间碱基序列的互补,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或 RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来,可以在细胞标本或组织标本上进行。
主要包含以下四种技术:
1. 基因组原位杂交技术(GISH)
2.荧光原位杂交技术(FISH)
3.多彩色荧光原位杂交技术(mFISH)
4.原位PCR(In situ PCR)
原位杂交技术的一般过程:
1、以经过标记的已知核酸分子为探针
2、以细胞内与探针序列互补的特异核酸分子为靶分子
3、在一定条件下使探针与靶核酸分子在原位发生杂交
4、探测
实验过程中关键因素:
杂交液、探针浓度、温度、湿度、pH、时间
应用:
1. 细胞特异mRNA转录的定位,用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究
2. 感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位
3. 癌基因、抑癌基因和各种功能基因在转录水平的表达和变化的检测
4. 基因在染色体上的定位和检测染色体的变化
5. 间期细胞遗传学的研究
6. 疾病的基因变化的研究
TDH-500原位杂交仪
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TDH-500原位杂交仪可以根据实验者的设置,自动完成变性和杂交过程。该系统一次可处理12张玻片。全密封式上盖设计和全自动的加湿方法保证了理想的温度和湿度,为实验提供了可靠的保证。玻片很容易用手取出或放入,利用触摸屏可以简单快速的编辑个用户定义方案和4种操作模式:变性/杂交、杂交、自定义模式以及原位PCR实验模式。
产品特点
程序化操作,保证实验结果更准确
1. 一次可进行12张切片的实验,良好的密封性和全自动的加湿方法保证样本的最佳温度和湿度
2. 有99个用户程序和3种操作模式,适合各种原位杂交实验
用户程序设定
1.变性/杂交、杂交、自定义模式以及原位PCR实验四种操作模式
2. 触摸屏操作,简单易行,显示屏随时显示实验条件,实验过程一目了然
精确的温度控制和湿度控制
1. 快速升降温,温度从37℃升至95℃仅需3分钟,95℃降到45℃仅需7分钟
2. 温度的良好均匀性
3. 优化的温度/湿度控制,系统完美的密封型,即保证了温度控制也保证了湿度控制
技术参数